气相色谱法测定咸鱼中的敌百虫和敌敌畏

张卫锋¹  洪振涛   李嘉静

（广州市农业标准与监测中心，广州 510308）

     摘  要  建立了咸鱼中敌百虫、敌敌畏农药残留的气相色谱分析方法。样品采用乙腈-水（1+1）溶液提取，加乙酸锌净化，用乙酸乙酯进行液液分配，最后采用DB-1701P或DB-5毛细管柱分离，使用气相色谱-火焰光度检测器分析。在四个添加水平的敌百虫、敌敌畏平均回收率（n=6）分别为91%～95%，90%～94.5%，相对标准偏差分别为3.82%～5.80%和3.57%～4.62%。该方法的检出限为：敌百虫0.005mg/kg，敌敌畏0.005mg/kg。方法用于市场上咸鱼样品中敌百虫、敌敌畏的测定，结果满意。

     关键词   气相色谱法，敌百虫，敌敌畏，咸鱼

前言

咸鱼是人们喜爱的一种食品，但为了防腐，一些无证企业在腌制或销售时在咸鱼上喷洒了敌百虫、敌敌畏，以防苍蝇叮咬。近年来，广东各地多次查出生产、加工有毒咸鱼等危害人民群众生命健康的事件，如台山市广海咸鱼生产过程中添加“敌敌畏”被央视国际网站《生活》栏目曝光，《中国质量报》报导廉江市质量技监局查出含有高浓度敌百虫的咸鱼近1200kg等。敌百虫、敌敌畏都属于有机磷类农药，敌百虫虽然是低毒农药，但其分解的第一个产物就是高毒的敌敌畏，这两种农药都被广泛的使用于防治卫生害虫蚊、蝇等^（1）。咸鱼中少量敌百虫、敌敌畏虽不至于一吃就有生命危险，但对人的身体存在慢性危害，如果含量过高还会出现急性食物中毒，出现胸闷、心悸、呕吐和腹痛等。敌百虫、敌敌畏作为一种杀虫剂，在咸鱼的生产加工过程中是禁止使用的。在农业部标准无公害食品咸鱼的安全指标都规定敌百虫、敌敌畏为不得检出^（2）（方法检出限0.01 mg/kg）。因此测定咸鱼中的敌百虫、敌敌畏是食品安全检测的一大任务，本方法中采用乙腈水溶液提取、乙酸锌净化、气相色谱FPD检测器同时测定咸鱼中的敌百虫、敌敌畏，效果良好，能够满足标准方法的判定要求。

1 试验部分

1.1主要仪器与试剂

气相色谱仪（AgiLent6890N，配FPD检测器，7683N自动进样器，美国AgiLent公司）；

自动振荡器（WSZ-100A，上海一恒科技有限公司）；

组织捣碎机（HR2864，珠海经济特区飞利浦家庭电器有限公司）；

高速冷冻离心机（5804R，德国Eppendorf公司）；

自动吹氮浓缩仪（N-EVAP^TM116，美国Organomalion Associates公司）；

旋涡混合器（XW-80A，上海医大仪器厂）；

6mL 固相萃取柱（无填料，使用时填充约3cm高无水硫酸钠来脱水）

50mL离心管、60mL分液漏斗、50mL针桶、底部带有刻度的鸡心瓶、0.20μm的有机相针头滤膜。

乙腈提取液（将色谱纯乙腈与去离子水按1：1体积比混合，摇匀）；

乙酸乙酯萃取溶剂（AR，将乙酸乙酯用硫酸钠溶液饱和）；

无水硫酸钠（AR，在620℃灼烧4h，贮于干燥器中备用）

20g/L硫酸钠溶液（AR）；

乙酸锌（AR）；

敌百虫、敌敌畏标准溶液（农业部环境保护科研监测所配制标准溶液，敌百虫、敌敌畏编号分别为GSBG23022-92，GSBG23023-92，2006年4月配制，浓度为100μg/mL；该标准溶液用丙酮稀释配制成使用混合标准溶液）。

1.2 色谱分析条件：

检测器：FPD；色谱柱：DB-1701P（30m×0.32mm×0.25μm）；色谱柱程序升温温度：50℃——200℃（10℃/min，HoLd 5min）；检测器温度：250℃；进样口温度：180℃；载气：高纯氮,纯度＞99.999％,2mL/min；氢气：纯度大于＞99.99％,150mL/min；干燥空气：110mL/min。进样2μL。

 1.3 试验方法

将咸鱼的肉样连皮切成小块，在组织捣碎机中粉碎成匀浆或粉末状均匀样品。称取20.0g匀浆试样（如果是粉末状样品，如三牙咸鱼，体积较大则可称取10g样品）置于50mL离心管中,加20mL乙腈提取溶液和1.0g乙酸锌，在振荡器上振荡1h。振荡后将离心管置于高速冷冻离心机中于6000 r·min^-1的速率离心10min，取出备用。净化：用移液管准确移取10 mL离心管中的上清液于盛有20 mL硫酸钠溶液的分液漏斗中,分别用10mL、10mL饱和乙酸乙酯萃取两次,合并萃取液。用50mL针桶串联填充有约3cm高无水硫酸钠的固相萃取柱，将萃取液全部通过无水硫酸钠过滤入干净干燥的鸡心瓶中，再用一定体积的乙酸乙酯洗涤针桶。在55℃下,用吹氮浓缩仪浓缩至近干,使用乙酸乙酯准确定容至2mL，旋涡混匀后通过0.20μm的有机相针头滤膜后直接上机测定。

2 结果与讨论

2.1 线性范围

配制浓度为0.0050、0.010、0.10、0.50、1.00、2.00、5.00mg/L的敌百虫、敌敌畏标准系列溶液，在FPD检测器上按上述条件测定，以峰面积为纵坐标、浓度为横坐标分别进行线性回归，结果表明在该范围内敌百虫、敌敌畏都有良好的线性关系；以3倍信噪比作为敌百虫、敌敌畏在仪器上的检出限，仪器的最小检出浓度可达0.005mg/L；结果见表1。

表1 敌百虫、敌敌畏校正曲线的相关系数、线性范围和检出限

TabLe1 The retention time,detection Limits and Linear ranges of trichlorfon and dichlorovos

农药 Pestcides	保留时间 Retention time （min）	线性相关系数 Correlation coefficient r	线性范围 Linear ranges （mg/L）	仪器检出限 Detection Limits （mg/L） (S/N=3)
敌百虫	4.60±0.01	0.9999	0.0050～5.00	0.005
敌敌畏	10.65±0.008	0.9999	0.0050～5.00	0.005

2.2 方法的精密度及回收率

使用FPD检测器，分别对两种农药在阴性样品（马胶咸鱼）中测定了四个添加水平的回收率、精密度，测定结果见表2。数据显示，两种农药的回收率均在84%～99%之间，敌百虫相对标准偏差为3.82%～5.80%，敌敌畏相对标准偏差为3.57%～4.62%。

表2 回收率及精密度试验结果

TabLe2 ResuLts of precision and recovery(n=6)

农药 Pestcides	添加量 Added (mg/kg)	测定值(mg/kg)                     Found（mg/kg）                                     1        2        3       4       5        6     平均值                                                     Average							平均回收率Average recovery （%）	RSD （%）
敌百虫	0.0050	0.0042	0.0048	0.0045	0.0046	0.0045	0.0048	0.0046	92	4.93
敌敌畏		0.0043	0.0045	0.0046	0.0043	0.0048	0.0046	0.0045	90	4.30
敌百虫	0.010	0.0084	0.0089	0.0095	0.0094	0.0086	0.0097	0.0091	91	5.80
敌敌畏		0.0085	0.0091	0.0096	0.0091	0.0088	0.0092	0.0091	91	4.12
敌百虫	0.10	0.094	0.103	0.093	0.09	0.093	0.094	0.095	95	4.67
敌敌畏		0.095	0.096	0.092	0.09	0.087	0.092	0.092	92	3.57
敌百虫	1.00	0.971	0.962	0.987	0.921	0.925	0.892	0.943	94.3	3.82
敌敌畏		0.982	0.967	0.991	0.901	0.943	0.885	0.945	94.5	4.62

2.3 结果的定性与定量

为了增加测定结果的可信度，分别使用弱极性柱子和中极性柱子来分析定性，在DB-5柱子和DB-1701P柱子上两种农药都能达到很好的分离。在上述操作条件下,敌百虫、敌敌畏在BD-5柱子上的保留时间分别是3.01±0.012min、8.53±0.01 min，在DB-1701P柱子上的保留时间分别是4.60±0.010min、10.65±0.008 min。因为不同物质在不同极性的柱子上都有相同的保留时间的可能性不大，因此采用两条不同极性的柱子进行定性可提高测定结果的可信度。两条柱子上灵敏度差异不大，如0.020mg/L敌敌畏在DB-1701P柱子上响应的峰面积为169，峰高为76，信噪比为58；在DB-5柱子上响应的峰面积为178，峰高为80，信噪比为60。

使用FPD检测器测定敌百虫、敌敌畏，以峰面积作为定量的依据，由于色谱峰有良好的分离，无论是使用DB-5柱子或DB-1701P柱子，都可准确进行定量（见图1）。

图1 敌百虫与敌敌畏在DB-1701P毛细管柱上的色谱图（1,敌百虫；2,敌敌畏）

Fig1 Chromatogram by DB-1701P capillary column for trichLorfon and dichlorvos（1, trichlorfon；2, dichlorvos）

2.4 方法检出限

使用FPD检测器，DB-1701P毛细管柱，测定敌百虫、敌敌畏的最低检出浓度都为0.005mg/L，称样量为10g时，该方法检出限可达到0.004mg/kg。添加回收实验表明在样品含量为0.005mg/kg时，仍有比较满意的回收率，仪器测定的待测液浓度也可满足定量要求（信噪比大于10），考虑到样品基质的干扰影响，可以按照添加回收实验结果来作为方法检出限，即敌百虫、敌敌畏方法检出限为0.005 mg/kg，此时该方法也能够满足咸鱼卫生质量检验判定的要求。

2.5 结论

使用该方法检测咸鱼样品中敌百虫、敌敌畏，简单快速，准确度、灵敏度比较高，结果满意。

参考文献：

[1]    张一宾，张怿.农药[M].北京:中国物资出版社,1997:55～60

[2]    NY 5291-2004 无公害食品 咸鱼[S].

 Gas Chromatography Determination of TrichLorfon and DichLorovos

Pesticide Residues in SaLt Fish

Zhang Weifeng¹, Hong Zhentao, Li Jiajing

(Guangzhou AgricuLturaL Standard and Supervisory Center, Guangzhou,Guangdong, P.R. 510308)

Abstract: Gas chromatography is set up to analyze the vestigiaL trichlorfon and dichlorvos in salted fish. Samples were extracted with acetonitrile and water which is ratio of one to one ，were purified by zinc acetate, and were distributed by Liquid-Liquid partition system of vinegar naphtha, then they were separated with DB-1701P or DB-5 by capillary column, and were detected by GC-FPD. The average recoveries are 91%～95% and 90%～94.5%，relatively deviations are 3.82%～5.80 and 3.57%～4.62%. The detection Limit of this method is 0.005mg/kg for trichlorfon and 0.005mg/kg for dichlorvos. It is satisfied that the method was applied to detect trichlorfon and dichlorvos in salt fish in the market.

    Keywords：GC; trichlorfon; dichlorvos; salt fish